作为一些酶的辅基而起辅因子作用。它以共价键的形式通过酰胺键和脱辅基酶蛋白的一个专一赖氨酰残基的ε- 氨基相连。ε-N-生物素酰-L-赖氨酸称为生物胞素(biocytin) (图4[生物素作为辅基的形式])。

需要生物素的酶类能催化二氧化碳的参入 (羧化作用)或转移，因而生物素和二氧化碳的固定密切相关。在羧化作用时还需要腺苷三磷酸(ATP)和镁离子的存在，此外生物素在蛋白质生物合成中以及转氨基作用中也起着重要作用。

泛酸

最初作为酵母的生长因子被分离出来。由于在生物中广泛存在，因而被称为泛酸。泛酸的辅酶形式是辅酶A（CoA或CoASH），是酶促乙酰化作用的辅助因子（图5[辅酶A的结构式]），在生物学上的重要性是作为酰基的载体或供体，在代谢上尤其是脂肪酸的代谢上甚为重要。

叶酸

由于最早是从菠菜叶中被分离出来，故名。

叶酸的辅酶形式是四氢叶酸(图6[四氢叶酸的结构式])，它作为酶促转移一碳基团（如甲酰基等）的中间载体而在嘌呤类、丝氨酸、甘氨酸和甲基基团的生物合成中起作用。此外，叶酸在核蛋白的生物合成上也是不可缺少的。